產(chǎn)品描述
Hieff Trans^® 懸浮細(xì)胞專用脂質(zhì)體核酸轉(zhuǎn)染試劑是一種陽(yáng)離子脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染試劑，經(jīng)優(yōu)化專門用于懸浮細(xì)胞的轉(zhuǎn)染，且適用于DNA、RNA和寡核苷酸的轉(zhuǎn)染，對(duì)大多數(shù)真核細(xì)胞具有很高的轉(zhuǎn)染效率。
Hieff Trans^® 懸浮細(xì)胞專用脂質(zhì)體核酸轉(zhuǎn)染試劑以無菌的液體形式提供。

 

運(yùn)輸與保存方法

冰袋（wet ice）運(yùn)輸。產(chǎn)品2-8ºC保存，一年有效。不可冷凍！

 

注意事項(xiàng)
1. 為得到最優(yōu)的轉(zhuǎn)染效率，請(qǐng)先用無血清培養(yǎng)基（如41405ES Hieff^® Optimal-MEM 培養(yǎng)基）稀釋Hieff Trans^® Suspension Cell-Free Liposomal Transfection Reagent（以下簡(jiǎn)稱Hieff Trans^®），之后與DNA或RNA做混合。
2. 使用高質(zhì)量的DNA或RNA有助于獲得較高的轉(zhuǎn)染效率，務(wù)必確保質(zhì)粒的高純度和無菌狀態(tài)，徹底去除質(zhì)粒提取過程中可能殘留的苯酚和高鹽，因?yàn)樯鲜龇宇悤?huì)對(duì)細(xì)胞造成損失，而高鹽分會(huì)干擾“Hieff Trans^®-復(fù)合物”的形成。質(zhì)粒中的內(nèi)毒素也是轉(zhuǎn)染的大敵，務(wù)必去除。

3. 轉(zhuǎn)染時(shí)培養(yǎng)基中不能添加抗生素。

4. 陽(yáng)離子脂質(zhì)體應(yīng)該在2-8℃保存，要注意避免多次反復(fù)長(zhǎng)時(shí)間開蓋，因?yàn)榭赡軙?huì)導(dǎo)致脂質(zhì)體氧化而影響轉(zhuǎn)染效率。

5. 需優(yōu)化DNA濃度和陽(yáng)離子脂質(zhì)體試劑量以得到最大的轉(zhuǎn)染效率。DNA和Hieff Trans^®的比例，通常推薦是1:2 或1:3

推薦轉(zhuǎn)染條件（以293懸浮培養(yǎng)細(xì)胞，質(zhì)粒DNA轉(zhuǎn)染為例）

最終轉(zhuǎn)染體積：30 mL

轉(zhuǎn)染細(xì)胞數(shù)目：3×10⁷ cell（最終細(xì)胞密度：1×10⁶  cell/mL），轉(zhuǎn)染之前需要確保細(xì)胞健康，細(xì)胞活力>90%。

質(zhì)粒DNA量：20–40 μg (typically use 30 μg)

轉(zhuǎn)染試劑量：40–80 μL (typically use 60 μL). Use 2 μL Hieff Trans^® per 1 μg of plasmid DNA transfected.

操作步驟（293懸浮細(xì)胞）

使用以下步驟在30 mL總體系內(nèi)轉(zhuǎn)染293細(xì)胞，轉(zhuǎn)染過程中生長(zhǎng)培養(yǎng)基內(nèi)不要添加抗生素，否則會(huì)降低轉(zhuǎn)染效率。轉(zhuǎn)染過程請(qǐng)同時(shí)設(shè)置陽(yáng)性對(duì)照組和陰性對(duì)照組（無DNA，無Hieff Trans^®）。

【注】對(duì)于其他的培養(yǎng)總體系，按比例放大或者縮小各組分用量。
1. 轉(zhuǎn)染當(dāng)天，在配制復(fù)合物之前，準(zhǔn)備轉(zhuǎn)染需要的細(xì)胞量【見上推薦轉(zhuǎn)染條件，即28 mL 生長(zhǎng)培養(yǎng)基內(nèi)加入3×10⁷ cell，臺(tái)盼藍(lán)排斥法確定細(xì)胞活力和小量細(xì)胞成團(tuán)量。劇烈漩渦混勻45 s以打破細(xì)胞團(tuán)，并用計(jì)數(shù)器測(cè)定總細(xì)胞量。細(xì)胞活力需>90%。】【注】：為了達(dá)到最優(yōu)效率，確保單細(xì)胞懸液。

2. 按照以下方法配制Hieff Trans^®-DNA復(fù)合物，
a, 用無血清培養(yǎng)基（如41405ES Hieff^® Optimal-MEM 培養(yǎng)基）稀釋30 μg質(zhì)粒DNA，使其終體積為1 mL；
b, 用無血清培養(yǎng)基（如41405ES Hieff^® Optimal-MEM 培養(yǎng)基）稀釋60 μL Hieff Trans^®，使其終體積為1 mL；輕輕混勻，于室溫孵育5 min；【注意】：過長(zhǎng)時(shí)間孵育會(huì)降低效率。
c, 孵育5 min之后，將稀釋的質(zhì)粒DNA加入稀釋的Hieff Trans^®，使其總體積為2 mL。輕輕混勻。
d, 室溫孵育20-30 min，使得DNA-Hieff Trans^®復(fù)合物形成。此時(shí)溶液可能會(huì)混濁，但不會(huì)影響轉(zhuǎn)染。
【注意】：DNA-脂質(zhì)體復(fù)合物室溫至少穩(wěn)定保存5 h。
3. 孵育完全后，將2 mL DNA-Hieff Trans^®復(fù)合物加入28mL 含293懸浮細(xì)胞的生長(zhǎng)培養(yǎng)基內(nèi)，使得細(xì)胞最終的密度約為1×10⁶ cell/mL。對(duì)于陰性對(duì)照，用2 mL無血清培養(yǎng)基（如41405ES Hieff^® Optimal-MEM 培養(yǎng)基）替換。
4. 37℃，5% CO₂軌道搖床培養(yǎng)，轉(zhuǎn)速125 rpm，直至進(jìn)行轉(zhuǎn)基因表達(dá)分析，無需去掉復(fù)合物或更換培養(yǎng)基。然而，可能有必要在4-6 h后更換生長(zhǎng)培養(yǎng)基，不會(huì)降低轉(zhuǎn)染活性。

HB230503