背景描述
蛋白純化是將目標(biāo)蛋白從實(shí)驗(yàn)樣本的總蛋白中分離出來，同時(shí)仍保留目的蛋白的生物學(xué)活性及化學(xué)完整性。在構(gòu)建載體階段，除了一些必要的表達(dá)元件，還需要考慮密碼子優(yōu)化以及標(biāo)簽的選擇。選擇合適的標(biāo)簽不但有利于蛋白的純化，促進(jìn)蛋白的可溶性，同時(shí)也不能影響蛋白的結(jié)構(gòu)功能和下游應(yīng)用。以下重點(diǎn)介紹GST、MBP標(biāo)簽。
表1 .GST、MBP標(biāo)簽介紹
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標(biāo)簽 |
大?。?/span>kD） |
功能 |
是否切除 |
標(biāo)簽切割酶 |
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GST |
26 |
增強(qiáng)蛋白可溶性，提高蛋白表達(dá)量，屏蔽毒性蛋白。僅能純化可溶性蛋白，如果蛋白不可溶，很難用變性的方法純化。 |
標(biāo)簽較大，可能會(huì)影響蛋白質(zhì)的功能和下游實(shí)驗(yàn)；需根據(jù)下游應(yīng)用考慮是否切除，如果要去除GST融合部分，可用位點(diǎn)特異性蛋白酶切除。 |
3C蛋白酶/PSP |
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MBP |
42 |
增強(qiáng)蛋白可溶性（尤其是真核蛋白）和正確折疊，提高蛋白表達(dá)量和蛋白穩(wěn)定性；屏蔽毒性蛋白 |
標(biāo)簽較大，對(duì)蛋白的結(jié)構(gòu)/功能會(huì)有一定影響，需考慮切除，如果要去除MBP融合部分，可用位點(diǎn)特異性蛋白酶切除。 |
Factor Xa、EK |
克隆過程中構(gòu)建相應(yīng)的氨基酸識(shí)別序列，即可保證后續(xù)可通過合適的蛋白酶對(duì)GST、MBP融合蛋白標(biāo)簽進(jìn)行切除。
GST標(biāo)簽蛋白親和純化介質(zhì)
GST標(biāo)簽蛋白親和層析是利用GST 融合蛋白與固定的谷胱甘肽(GSH)通過硫鍵共價(jià)親和，通過GSH交換洗脫的原理來進(jìn)行純化。該純化中，凝膠手臂上通過硫鍵結(jié)合一個(gè)谷胱甘肽，然后利用谷胱甘肽與谷胱甘肽巰基轉(zhuǎn)移酶（即GST-tag）之間酶和底物的特異性作用力，使得帶GST標(biāo)簽的融合蛋白能夠與凝膠上的手臂谷胱甘肽結(jié)合，從而將帶標(biāo)簽的蛋白與其他蛋白分離開。谷胱甘肽通常有氧化型GSSG和還原型 GSH，當(dāng)我們使用GSH洗脫時(shí)，GSH會(huì)與凝膠上的谷胱甘肽競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合融合蛋白，從而將目標(biāo)蛋白洗脫。
GSTSep Glutathione Agarose Resin是一種GST標(biāo)簽蛋白純化樹脂，結(jié)構(gòu)上以6%瓊脂糖凝膠為基質(zhì)，通過12個(gè)原子的間隔臂，用化學(xué)方法共價(jià)結(jié)合還原型谷胱甘肽制作而成。該設(shè)計(jì)使樹脂的純化效率得到了較大提高，使其每毫升介質(zhì)可承載>20 mg GST融合蛋白。本品特異性好，性價(jià)比高，可以一步純化各種表達(dá)系統(tǒng)中谷胱甘肽-S-轉(zhuǎn)移酶、谷胱甘肽依賴性蛋白和谷胱甘肽重組衍生物。
表2.翌圣GST純化產(chǎn)品選購(gòu)指南
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產(chǎn)品貨號(hào) |
20507ES |
20508ES |
20509ES/20510ES |
20562ES |
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英文名稱 |
GSTSep Glutathione Agarose Resin |
GSTSep Glutathione Agarose Resin 4FF |
GSTSep Glutathione 4FF Chromatography Column, 1 mL / 5 mL |
GSTSep Glutathione MagBeads |
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中文名稱 |
谷胱甘肽瓊脂糖樹脂（用于GST標(biāo)簽蛋白純化) |
谷胱甘肽高速純化樹脂（用于GST標(biāo)簽蛋白純化) |
GST標(biāo)簽蛋白純化預(yù)裝柱1 mL/5 mL |
GST標(biāo)簽蛋白純化 磁珠 |
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基質(zhì) |
交聯(lián)的6% 瓊脂糖凝膠 |
高度交聯(lián)的4% 瓊脂糖凝膠 |
高度交聯(lián)的4% 瓊脂糖凝膠 |
磁性瓊脂糖微球 |
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耐壓 |
0.1 MPa, 1 bar |
0.3 MPa, 3 bar |
0.3 MPa, 3 bar |
N/A |
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載量 |
＞20 mg GST 蛋白（40 kDa）/mL基質(zhì) |
＞10 mg GST 蛋白（40 kDa）/mL基質(zhì) |
5-10 mg GST標(biāo)簽融合蛋白/mL磁珠 |
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應(yīng)用 |
載量高、基質(zhì)的耐壓一般，適合孵育法、重力柱小量純化，推薦實(shí)驗(yàn)室規(guī)?？蛻羰褂?/span> |
載量稍低、基質(zhì)的耐壓性高，搭配蛋白純化儀可以用于工業(yè)大規(guī)模蛋白的純化，更容易放大規(guī)模 |
載量最低，通過磁性分離快速便捷地進(jìn)行蛋白純化 |
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附：GSTSep Glutathione MagBeads（Cat#20562ES）產(chǎn)品特點(diǎn)
1、通過磁性分離方式直接從生物樣品中一步純化出高純度的目標(biāo)蛋白，極大地簡(jiǎn)化純化工藝和提高純化效率，適合科研和工業(yè)領(lǐng)域便捷地進(jìn)行GST融合蛋白的純化。
2、 使用該磁珠進(jìn)行GST Pull-down實(shí)驗(yàn)，由于磁性分離不需要多次離心和較長(zhǎng)的孵育時(shí)間，與傳統(tǒng)的層析法相比，操作更簡(jiǎn)單、快速和自動(dòng)化
附：GST-Tag Protein purification Kit(Agarose Resin)（Cat#20753ES）
GST-Tag Protein purification Kit(Agarose Resin) （GST標(biāo)簽蛋白純化試劑盒(瓊脂糖樹脂法)由GSTSep Glutathione Agarose Resin（Cat#20507ES）、優(yōu)化預(yù)制的緩沖液（平衡、洗雜、洗脫緩沖液）、5 mL重力層析空柱（Cat#20522ES）組成，用于高效、快速純化GST標(biāo)簽蛋白，為GST標(biāo)簽蛋白的純化帶來了極大的便利。
MBP標(biāo)簽蛋白親和純化介質(zhì)
MBPSep Dextrin Agarose Resin是一種純化帶有麥芽糖結(jié)合蛋白（MBP）標(biāo)簽蛋白的親和層析介質(zhì)，MBP可促進(jìn)連接蛋白的正確折疊，增加在細(xì)菌中過量表達(dá)的融合蛋白的溶解性，尤其是真核蛋白。MBPSep Dextrin Agarose Resin 6FF可以一步純化MBP融合蛋白，結(jié)合的融合蛋白可以用10 mM麥芽糖進(jìn)行溫和洗脫，保護(hù)了目的蛋白的活性，MBP融合部分后續(xù)可用位點(diǎn)特異性蛋白酶切除。
表3.翌圣MBP純化產(chǎn)品選購(gòu)指南
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產(chǎn)品貨號(hào) |
20515ES |
20516ES/20517ES |
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英文名稱 |
MBPSep Dextrin Agarose Resin 6FF |
MBPSep Dextrin 6FF Chromatography Column, 1 mL / 5 mL |
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中文名稱 |
MBP標(biāo)簽蛋白高度交聯(lián)純化樹脂 |
MBP標(biāo)簽蛋白純化預(yù)裝柱，1 mL/5 mL |
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基質(zhì) |
高度交聯(lián)的6%瓊脂糖凝膠 |
高度交聯(lián)的6%瓊脂糖凝膠 |
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配體 |
糊精 |
糊精 |
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耐壓 |
0.3 MPa, 3 bar |
0.3 MPa, 3 bar |
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載量 |
＞10 mg MBP 蛋白（80 kDa）/mL基質(zhì) |
＞10 mg MBP 蛋白（80 kDa）/mL基質(zhì) |
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應(yīng)用 |
適合孵育法、重力柱小量純化，推薦實(shí)驗(yàn)室規(guī)?？蛻羰褂?。其耐壓骨架，也可搭配蛋白純化儀用于工業(yè)大規(guī)模蛋白的純化，更容易放大規(guī)模 |
預(yù)裝柱具有標(biāo)準(zhǔn)接口，可以適配商品化的各類中壓色譜系統(tǒng)，如ÄKTA等，方便客戶操作 |
測(cè)試數(shù)據(jù)
產(chǎn)品信息
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產(chǎn)品定位 |
產(chǎn)品名稱 |
貨號(hào) |
規(guī)格 |
目錄價(jià)/元 |
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GST標(biāo)簽蛋白純化 |
GSTSep Glutathione Agarose Resin 谷胱甘肽瓊脂糖樹脂（用于GST標(biāo)簽蛋白純化) |
10 mL /50 mL/ 100 mL/ 1000 mL |
928/3848/ 6898/48686 |
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GSTSep Glutathione Agarose Resin 4FF 谷胱甘肽高速純化樹脂（用于GST標(biāo)簽蛋白純化) |
10 mL /50 mL/ 100 mL/ 1000 mL |
1238/4568/7928/54686 |
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GSTSep Glutathione 4FF Chromatography Column, 1 mL GST標(biāo)簽蛋白純化預(yù)裝柱, 1 mL |
1 mL/ 5x1 mL |
328/1348 |
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GSTSep Glutathione 4FF Chromatography Column, 5 mL His標(biāo)簽蛋白純化預(yù)裝柱, 5 mL |
5 mL/ 5x5 mL |
938/3928 |
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GSTSep Glutathione MagBeads His標(biāo)簽蛋白純化磁珠 |
1 mL /5 mL/ 25 mL |
285/625/ 1565 |
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GST-Tag Protein purification Kit(Agarose Resin) GST標(biāo)簽蛋白純化試劑盒(瓊脂糖樹脂法) |
10 mL |
1315 |
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MBP標(biāo)簽蛋白純化 |
MBPSep Dextrin Agarose Resin 6FF MBP標(biāo)簽蛋白高度交聯(lián)純化樹脂 |
5 mL /25 mL |
858/2958 |
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MBPSep Dextrin 6FF Chromatography Column, 1 mL MBP標(biāo)簽蛋白純化預(yù)裝柱1 mL |
1 mL/ 5x1 mL |
358/1258 |
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MBPSep Dextrin 6FF Chromatography Column, 5 mL MBP標(biāo)簽蛋白純化預(yù)裝柱5 mL |
5 mL/ 5x5 mL |
1238/3958 |
相關(guān)產(chǎn)品訂購(gòu)
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產(chǎn)品名稱 |
貨號(hào) |
規(guī)格 |
目錄價(jià)/元 |
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Glutathione,Reduced(GSH) 還原型谷胱甘肽(GSH) |
10 g /100 g/ 1 kg |
209/1156/ 4596 |
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3C Protease |
100 U/500 U/ 500 U×2 |
372/923/1473 |
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Bovine Thrombin,High Specific Activity,>2000 IU/mg 牛凝血酶(高活力,>2000 IU/mg) |
1 KU/2 KU |
536/956 |
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Recombinant Bovine Enterokinase, His, Expressed in Yeast 酵母表達(dá)重組牛腸激酶(His標(biāo)簽) |
100 U/500 U/ 5000 U |
425/1245/ 6745 |
