產(chǎn)品描述
EveGreen是一種新一代用于實(shí)時(shí)定量PCR（qPCR）的DNA結(jié)合染料。該染料基于“按要求釋放”DNA結(jié)合技術(shù)設(shè)計(jì)，結(jié)構(gòu)上由兩個(gè)單體染料分子通過一個(gè)彈性臂連接成一個(gè)二聚體，在沒有DNA存在時(shí)，該結(jié)構(gòu)呈無熒光環(huán)狀結(jié)構(gòu)，一旦有DNA出現(xiàn)，則恢復(fù)隨機(jī)形態(tài)并與DNA結(jié)合發(fā)出強(qiáng)烈的綠色熒光。
與市場上其他熒光染料如FAM、SYBR Green I相比，EveGreen具有更卓越的特性：1）極高的靈敏度：在推薦濃度下使用時(shí)可以獲得比SYBR Green I更強(qiáng)的PCR擴(kuò)增信號。2）PCR抑制性極小，非常適合多重PCR及HRM分析：智能化“按要求釋放”DNA結(jié)合技術(shù)使得EveGreen對PCR的抑制遠(yuǎn)小于SYBR Green I。因此，使用EveGreen進(jìn)行的qPCR實(shí)驗(yàn)可以使用快速PCR步驟。同時(shí)，EveGreen在實(shí)驗(yàn)中可以使用較高的濃度，從而獲得遠(yuǎn)強(qiáng)于SYBR Green I擴(kuò)增信號。較高濃度的EveGreen也消除了“染料重分布”的缺陷，在推薦濃度下使用時(shí)，無擴(kuò)增子之間的染料遷移現(xiàn)象，使EveGreen既可用于多重PCR，也可用于高分辨率（高清晰）熔解曲線分析(HRM)。3）超強(qiáng)穩(wěn)定性：在正常的儲存、操作和PCR過程中不會被破壞。在緩沖溶液中的染料可以安全的儲存在室溫或冰箱里，也可以反復(fù)凍融。4）安全性好：細(xì)胞膜穿透性測試表明，EveGreen幾乎不能穿透細(xì)胞膜，安全性高。且EveGreen沒有誘變性和細(xì)胞毒性。5）優(yōu)越的兼容性：和SYBR Green I光譜相似，和各知名品牌的qPCR儀器兼容。用EveGreen 替代SYBR Green I，無需改變?nèi)魏文壳笆褂玫牟僮鞑襟E和儀器設(shè)備。
此外，EveGreen是目前僅有的可以用于微滴式數(shù)字PCR系統(tǒng)的染料，在微流控PCR，恒溫?cái)U(kuò)增，毛細(xì)管電泳，DNA定量以及細(xì)胞活力鑒定等領(lǐng)域也具有卓越的表現(xiàn)。本品以20×EveGreen水溶液形式提供。

運(yùn)輸與保存方法

冰袋運(yùn)輸。4℃避光保存，保質(zhì)期24個(gè)月。

注意事項(xiàng)

1）做qPCR時(shí)注意設(shè)置陽性和陰性對照。

2）為了您的安全和健康，請穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。

3）本產(chǎn)品僅作科研用途！

 

使用方法

1．按照下表根據(jù)所配制體系計(jì)算各組分用量*

Reagent	Final concentration in the mixture
ddH2O	Adjust to final volume
Taq polymerase buffer without magnesium	1×
dNTP	0.2 mM each
MgCl2	2.5 mM
EveGreen	1×
Taq DNA polymerase	1-5 units per reaction
Each of primers	0.1-1 uM

【注】：
 1）請根據(jù)不同的儀器類型，不加入或加入合適濃度的參比染料ROX。
 2）該體系需根據(jù)所使用的Taq酶的不同進(jìn)行適當(dāng)優(yōu)化。

2．根據(jù)實(shí)驗(yàn)用量于冰上向無菌離心管中依次加入水，Taq polymerase buffer, dNTPs, MgCl2, EveGreen, Taq polymerase, and primers等配制qPCR反應(yīng)體系（1×Master mix）；

3．將1×Master mix 適量分裝至無菌PCR管中，并加入DNA (50 ng/反應(yīng)).

4．按照儀器類型選擇合適的擴(kuò)增程序。

相關(guān)產(chǎn)品

產(chǎn)品名稱	貨號	規(guī)格
Hieff® qPCR SYBR® Green Master Mix (No Rox )HOT	11201ES03/08	1/5 mL
Hieff® qPCR SYBR® Green Master Mix (Low Rox Plus) HOT	11202ES03/08	1/5 mL
Hieff® qPCR SYBR® Green Master Mix (High Rox Plus) HOT	11203ES03/08	1/5 mL

HB210824