產品描述

CFDA, SE，英文全稱Carboxyfluorescein diacetate, succinimidyl ester，是一種可對活細胞進行熒光標記的細胞示蹤染料，不僅可用于細胞增殖的體外實驗，還可用于追蹤細胞在體內的分裂增殖過程。 

CFDA, SE是二乙酸熒光素（Fluorescein diacetate，FDA）的衍生物，具細胞膜滲透性，本身不具有熒光發(fā)光性。當通過被動運輸穿透細胞膜進入活細胞后，可被胞漿內的酯酶催化生成羧基熒光素琥珀酰亞胺酯（carboxyfluorescein succinimidyl ester，CFSE），可發(fā)強烈的綠色熒光，不能穿透細胞膜，能完好的保留在胞內。CFSE還可自發(fā)性并不可逆地與細胞內的氨基結合從而偶聯(lián)到細胞蛋白質上，同時過量且未被偶聯(lián)的CFDA, SE通過被動擴散回到細胞外培養(yǎng)基內，被后續(xù)清洗步驟所清除。經CFDA, SE標記的非分裂細胞的熒光非常穩(wěn)定，穩(wěn)定標記的時間可達數(shù)月，因此非常適用于細胞群落分析。

CFDA, SE標記細胞的熒光非常均一，優(yōu)于以前使用的其他細胞示蹤熒光探針如PKH26，并且分裂后的子代細胞的熒光分配也更均一。在細胞分裂增殖過程中，CFSE 標記熒光可平均分配至兩個子代細胞中，熒光強度變?yōu)橛H代細胞的一半，通過流式細胞儀（FL1通道）根據(jù)熒光強度的不同，可檢測出未分裂細胞，分裂一次（1/2的熒光強度），二次（1/4的熒光強度），三次（1/8的熒光強度），以及更多分裂次數(shù)的細胞。CFSA，SE可檢測分裂次數(shù)多達八次甚至更多。經CFDA, SE標記的細胞可用于體外和體內增殖研究，且具有不會使鄰近細胞染色的功能。CFDA, SE最常用于淋巴細胞的增殖檢測，也可用于成纖維細胞，自然殺傷細胞，造血祖細胞等其他細胞的增殖檢測。

CFDA, SE標記細胞呈綠色熒光，Ex=494 nm，Em=521 nm，除了流式細胞儀檢測細胞增殖外，還可用熒光酶標板定量活細胞數(shù)目，或者用熒光顯微鏡進行均一染色的細胞示蹤觀察。本品以粉末形式提供，需用DMSO制備儲存液后再使用。

 

產品性質

中文名稱（Chinese Synonym）	5(6)-羧基二乙酸熒光素琥珀酰亞胺酯
英文名稱（English Synonym）	5-(and 6)-Carboxyfluorescein diacetate, succinimidyl ester
CAS號（CAS NO.）	150347-59-4
分子式（Molecular Fomular）	C29H19NO11
分子量（Molecular Weight）	557.46
純度（Purity）	≥94%（HPLC）
外觀（Appearance）	類白色固體
Ex/ Em	494/521 nm
結構式（Structure）

 

運輸與保存

室溫運輸。-20℃干燥避光保存，有效期2年。避免反復凍融。

 

注意事項

1）不同的細胞其細胞內酯酶活性不同，因此染色效果具有差異性。

2）熒光染料均存在淬滅問題，染色過程需盡量避光。

3）為了您的健康，實驗操作時請穿實驗服和帶一次性手套。

 

操作方法

1. CFSE儲存液（5 mM）的配制

用1 mL DMSO溶解2.79 mg CFSE，充分混勻即得到5 mM的儲存液（1 mg/ml的CFSE溶液濃度相當于其摩爾濃度1.8 mM）。

【注意】該儲存液需立即使用，根據(jù)使用量計算如有剩余請務必分裝后于≤-20℃避光干燥保存，避免反復凍融。

2. CFSE工作液（0.5-5µM）的配制

使用前用含20 mM Hepes的Hanks 緩沖液（HHBS）或其他不含氨基的合適緩沖液（pH=7.0）對上述CFSE 儲存液進行1,000~10,000倍稀釋，并旋渦震蕩混勻。

3. 操作方法

【注意】：以下是針對活細胞染色的推薦步驟，可根據(jù)實際情況進行細胞藥物處理，適當調整實驗步驟。

1）離心收集細胞，調整細胞濃度為1-5×10⁵個/管；

2）用500 µL CFSE工作液懸浮細胞，于室溫或37℃避光孵育10-30 min；

3）吸除CFSE 染液，用HHBS或其他合適緩沖液清洗細胞，用500 µL預熱HHBS或培養(yǎng)液懸浮細胞；

4）在Ex/Em=490/520 nm下用流式細胞儀（FL1通道）或熒光顯微鏡觀察細胞。

HB220915