——效率高不高，一轉(zhuǎn)便知道
>>>背景介紹
轉(zhuǎn)染能夠讓我們更好的研究目的基因是如何在細胞中進行表達和調(diào)控。目前常見的轉(zhuǎn)染方法有：磷酸鈣共沉淀法、電穿孔法、DEAE-葡聚糖和ploybrene、機械法（如顯微注射和基因槍法）、陽離子脂質(zhì)體試劑等，其中陽離子脂質(zhì)體試劑轉(zhuǎn)染是目前常用的轉(zhuǎn)染方法。
圖1：不同轉(zhuǎn)染方法轉(zhuǎn)染示意圖（圖片來源于每日生物評論）
不同轉(zhuǎn)染方法的優(yōu)劣對比
|
轉(zhuǎn)染方法 |
優(yōu)勢 |
劣勢 |
|
磷酸鈣共沉淀法 |
價格低廉，操作較為簡單
|
轉(zhuǎn)染效率不穩(wěn)定，易發(fā)生DNA聚集等影響轉(zhuǎn)染的效率，高胞毒性，轉(zhuǎn)染效率較差 |
|
電穿孔法 |
效率高，適用于所有類型的細胞 |
電穿孔儀價格相對昂貴，細胞致死率高，核酸和細胞用量大 |
|
DEAE-葡聚糖 |
對貼壁細胞轉(zhuǎn)染比較有效，也可用于某些懸浮細胞，操作簡單、結(jié)果可重復(fù) |
對細胞有偏好性，對細胞有一定的毒副作用，且轉(zhuǎn)染時需要血清抑制細胞生長 |
|
ploybrene聚凝胺 |
操作相對簡單、價格一般 |
效率低、應(yīng)用性有一定的局限 |
|
陽離子脂質(zhì)體試劑 |
操作簡單、效率高、適用性廣、重復(fù)性好、毒性低 |
價格略高于其他化學(xué)試劑 |
|
病毒侵染法 |
效率高、對難轉(zhuǎn)染細胞、原代細胞的轉(zhuǎn)染效果很好 |
病毒包裝流程復(fù)雜、病毒有一定危險性 |
|
聚乙烯亞胺(polyethylenimine,PEI) |
價格低、操作簡單，適用范圍較廣 |
效率低于脂質(zhì)體類轉(zhuǎn)染試劑、一些細胞接觸后產(chǎn)生敏感反應(yīng) |
Hieff Trans脂質(zhì)體核酸轉(zhuǎn)染試劑作為一款陽離子脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染試劑，與應(yīng)用廣泛的Lipo2000相比，具有更高的轉(zhuǎn)化效率和更加便捷的操作。目前已經(jīng)在多種細胞系中得以驗證，具體可參見下文中驗證過的細胞系匯總。
>>>作用原理
陽離子能夠通過表面所帶正電荷的靜電作用將核酸包裹，形成核酸-脂質(zhì)體復(fù)合體。細胞膜表面帶負電荷，能夠?qū)⒃搹?fù)合體吸附，被吸附后的復(fù)合體能夠通過膜的融合作用或者細胞內(nèi)吞的方式形成包涵體進入細胞。有小部分的DNA 能夠從包涵體中被釋放，并進入細胞質(zhì)中，再進一步進入細胞核內(nèi)轉(zhuǎn)錄、表達。
圖2：脂質(zhì)體介導(dǎo)的轉(zhuǎn)染和內(nèi)吞過程
>>>Hieff Trans轉(zhuǎn)染試劑產(chǎn)品特點
高效性： 可對大多數(shù)真核細胞進行轉(zhuǎn)染，并且對于常見細胞系轉(zhuǎn)染效率達90%以上；
低毒性：轉(zhuǎn)染細胞形態(tài)良好并表達大量的轉(zhuǎn)染基因蛋白；
操作簡便：可以直接將脂質(zhì)體復(fù)合物加入到含血清的培養(yǎng)基中；
多樣性：適合瞬時轉(zhuǎn)染和穩(wěn)定轉(zhuǎn)染試驗。
>>>操作流程
圖3：細胞轉(zhuǎn)染實驗流程
>>>產(chǎn)品數(shù)據(jù)
圖4：轉(zhuǎn)染試劑雙質(zhì)粒驗證結(jié)果
驗證過的細胞系匯總
|
293T |
293FT |
HEK293 |
HEK 293T |
Caco2 |
|
COS-7 |
DF-1 |
Lenti X-293T |
HeLa |
HepG2 |
|
LM3 |
MCF-7 |
MDA-MB-231 |
MEF |
NCI-H1975 |
|
NIH-3T3 |
PC12 |
Raw264.7 |
Vero |
H9c2 |
|
Hepa1-6 |
MCF10A |
CHO |
5-8F |
BV-2 |
|
A549 |
3t3 |
H520 |
HUVEC |
C6 |
|
HaCaT |
N2A |
SGC-7901 |
H9 |
MKN-28 |
|
Hep 3B |
SMCC7721 |
RKO |
C2C12 |
More… |
>>>客戶反饋結(jié)果展示
Hieff Trans Liposomal 轉(zhuǎn)染應(yīng)用
|
細菌蛋白激活細胞自噬體形成 細胞：Hela 轉(zhuǎn)染質(zhì)粒：細菌效應(yīng)蛋白A LC3II:自噬體標(biāo)記蛋白 |
細胞分裂紡錘體結(jié)構(gòu) 細胞：Hela 轉(zhuǎn)染質(zhì)粒：Flag-tubulin 細胞核染色：Hoechst33342 |
||
|
Hieff Trans |
Lipo3000 |
Hieff Trans |
Lipo2000 |
| 圖片來源：復(fù)旦大學(xué) 細胞系：Hek293 核酸類型：DNA | 圖片來源：長春應(yīng)化所 細胞系：Hela 核酸類型：DNA | ||
流式熒光觀察結(jié)果
|
Hieff Trans (13.27%) |
Lipo2000 (8.64%) |
FuGenHD (9.24%) |
| 細胞系：C2c12 熒光蛋白：EGFP 核酸類型：DNA 數(shù)據(jù)來源：華南農(nóng)業(yè)大學(xué) | ||
客戶提供的部分細胞系轉(zhuǎn)染數(shù)據(jù)（僅供參考）
|
細胞 |
培養(yǎng)板 |
細胞密度 |
DNA |
Hieff Trans |
效率 |
|
293T |
6孔 |
80% |
1μg |
2μL |
90% |
|
293FT |
24孔 |
85% |
1μg |
4μL |
90% |
|
Hela |
12孔 |
90% |
0.2μg |
0.6μL |
90% |
|
Raw264.7 |
35mm皿 |
80% |
1μg |
2μL |
90% |
|
Hek293 |
6孔 |
95% |
2μg |
10μL |
80-90% |
|
NCI-H1975 |
6孔 |
80% |
4μg |
10μL |
80% |
|
3t3 |
12孔 |
90% |
1μg |
5μL |
50% |
>>>價格比較
圖5：單次轉(zhuǎn)染反應(yīng)各公司價格對比
>>>FAQ
Q1：配制核酸轉(zhuǎn)染試劑復(fù)合物時能否有血清的存在？
答：血清的存在會影響脂質(zhì)體的形成，建議配制核酸轉(zhuǎn)染試劑復(fù)合物時采用無血清培養(yǎng)基（一般推薦MEM培養(yǎng)基）。
Q2：轉(zhuǎn)染實驗過程中是否需要更換成無血清培養(yǎng)基？
答：不需要，我們的轉(zhuǎn)染試劑可以在含血清的介質(zhì)中進行轉(zhuǎn)染的過程。
Q3：轉(zhuǎn)染后需要進行終止嗎？
答：不需要。脂質(zhì)體復(fù)合物可以穩(wěn)定存在6個小時。如果在進行轉(zhuǎn)染前沒有進行細胞換液，為了保證細胞正常生長所需的營養(yǎng)，需要在4～6小時后換用新的培養(yǎng)基。但如果轉(zhuǎn)染之前已進行過換液則在脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染后不需要進行再次換液。
Q4：轉(zhuǎn)染試劑的保存及使用過程中的注意事項？
答：本試劑一定要4℃保存，要注意避免反復(fù)多次長時間開蓋，長時間開蓋會導(dǎo)致脂質(zhì)體氧化而影響轉(zhuǎn)染效率。
Q5：若想提高轉(zhuǎn)染效率，應(yīng)該注意什么？
答：a:轉(zhuǎn)染時細胞的密度，90%-95%。
b:轉(zhuǎn)染時，核酸和脂質(zhì)體稀釋液要用MEM無血清培養(yǎng)基。
c:轉(zhuǎn)染后4-6h可選擇換液。
>>>使用客戶已發(fā)表文章
[1]. Hao, H., et al., Loss of Endothelial CXCR7 Impairs Vascular Homeostasis and Cardiac Remodeling After Myocardial Infarction: Implications for Cardiovascular Drug Discovery. Circulation, 2017. 135(13): p. 1253-1264.（IF 18.881）
[2] Zhang K, Zhao X, et al. Enhanced Therapeutic Effects of Mesenchymal Stem Cell-Derived Exosomes with an Injectable Hydrogel for Hindlimb Ischemia Treatment. ACS Appl Mater Interfaces. 2018 Sep 12;10(36):30081-30091.（IF 8.09）
[3] Yang R, Yang E, et al. IL-12+IL-18 cosignaling in human macrophages and lung epithelial cells activates cathelicidin and autophagy, inhibiting intracellular mycobacterial growth. J Immunol. 2018 Apr 1;200(7):2405-2417.（IF 4.539）
[4] Cheng H, Fan X, et al. Cyclodextrin-Based Star-Like Amphiphilic Cationic Polymer as a Potential Pharmaceutical Carrier in Macrophages. Macromol Rapid Commun. 2018 May 28:e1800207. （IF 4.441）
>>>產(chǎn)品訂購
|
產(chǎn)品名稱 |
產(chǎn)品編號 |
規(guī)格 |
價格（元） |
|
Hieff Trans Liposomal Transfection Reagent 脂質(zhì)體核酸轉(zhuǎn)染試
|
|||
|
40802ES03 |
1.0 mL |
1308 |
|
|
40802ES08 |
5×1 mL |
4878 |
>>>相關(guān)產(chǎn)品推薦
|
應(yīng)用場景 |
名稱 |
貨號 |
規(guī)格 |
|
細胞類型：貼壁/懸浮 核酸類型：DNA、siRNA |
40802ES02 |
0.5 mL |
|
|
40802ES03 |
1.0 mL |
||
|
40802ES08 |
5×1 mL |
||
|
細胞類型：貼壁/懸浮 |
40803ES70 |
200 T |
|
|
用途：病毒感染、DNA轉(zhuǎn)染 |
40804ES76 |
500 μL |
|
|
40804ES86 |
5×500 μL |
||
|
細胞類型：懸浮 |
40805ES02 |
0.5 mL |
|
|
40805ES03 |
1.0 mL |
||
|
40805ES08 |
5×1 mL |
||
|
細胞類型：貼壁/懸浮 |
40806ES01 |
0.1 mL |
|
|
40806ES02 |
0.5 mL |
||
|
40806ES03 |
1.0 mL |
||
|
細胞類型：貼壁/懸浮 |
40808ES02 |
0.5 mL |
|
|
40808ES03 |
1 mL |
||
|
40808ES08 |
5×1 mL |
||
|
細胞類型：貼壁/懸浮 |
40809ES01 |
0.1 mL |
|
|
40809ES03 |
1 mL |
||
|
細胞類型：貼壁/懸浮 |
40815ES03 |
1 g |
|
|
40815ES08 |
5×1 g |
||
|
細胞類型：貼壁/懸浮 |
40816ES02 |
100 mg |
|
|
40816ES03 |
1 g |
||
|
細胞類型：293 |
40820ES04 |
1.5 mL |
|
|
40820ES10 |
10 mL |
||
|
40820ES60 |
100 mL |
||
|
細胞類型：293 核酸類型：DNA 用途：AAV/LV載體大規(guī)模生產(chǎn) |
40821ES10 |
10 mL |
|
|
40821ES60 |
100 mL |
||
|
40821ES80 |
1 L |
更多產(chǎn)品敬請詳詢400-6111-883
HB20190220
