PCR技術(shù)已經(jīng)成為生物學(xué)實驗室的常備技能,熒光定量,基因測序等大家耳熟能詳?shù)募夹g(shù)也和PCR息息相關(guān)。微量的DNA模板在DNA聚合酶、引物的作用下,以dNTP為原料,經(jīng)過數(shù)十次的熱循環(huán)過程便可實現(xiàn)指數(shù)級的增長,耗時大約1-2小時。一個保真性好的DNA聚合酶對于這種精細(xì)又快速的實驗至關(guān)重要。
那么聚合酶保真度是指什么呢?
DNA聚合酶的保真度是指準(zhǔn)確復(fù)制目的模板的結(jié)果。具體涉及到多個步驟,包括讀取模板鏈,選擇正確的三磷酸核苷。為了高效區(qū)分正確和錯誤的核苷酸,一些DNA聚合酶具有3’到5’核酸外切酶活性。這種“校正”活性可切除不正確摻入的單核苷酸,并將其替換成正確的核苷酸。高保真PCR使用摻入錯誤率低且具有校正活性的DNA聚合酶,以保證目的DNA的忠實復(fù)制。
這樣的反應(yīng)在分子實驗室?guī)缀趺刻於荚谶M(jìn)行著。隨著技術(shù)的不斷更新,大家對產(chǎn)品的要求也在不斷提高,為此,翌圣新開發(fā)了具有高保真性、高成功率、高特異性的Hieff Canace® 超高保真酶,立志為科研事業(yè)貢獻(xiàn)一己之力!
Hieff Canace® Plus高保真酶六大特點(diǎn)
超高保真:保真性是Taq酶的83倍。
特異性強(qiáng):熱啟動DNA聚合酶提高反應(yīng)的特異性,擴(kuò)增目的條帶單一。
擴(kuò)增速度快:極限擴(kuò)增速度10 sec/kb,30 sec/kb可高效擴(kuò)增絕大多數(shù)片段。
靈敏度高:可擴(kuò)增低至1 pg模板。
穩(wěn)定性好:37°C保存7 d,反復(fù)凍融50次,不影響產(chǎn)品性能。
操作方便:即用型預(yù)混液,室溫加樣,操作簡便,保證了更好的重復(fù)性與準(zhǔn)確性。
超高保真性
圖1. 10154具有超高保真性,保真性是Taq酶的83倍。用10154和Taq酶同時進(jìn)行擴(kuò)增反應(yīng),對其產(chǎn)物(約250000個堿基)進(jìn)行測序,10154ES僅有6個堿基發(fā)生錯配,Taq酶錯配堿基數(shù)為609個。10154ES超高的保真性對于要求保真性的克隆等可以放心進(jìn)行PCR擴(kuò)增。
特異性強(qiáng)
圖2. 枯草芽孢桿菌gDNA 1kb片段擴(kuò)增。T:市場某品牌,10154:Yeasen高保真酶。目的條帶單一,產(chǎn)量高。M:100 bp DNA Marker(10507ES),模板投入量50 ng,體系50μL。
擴(kuò)增速度快
圖3. Hieff Canace® Plus高保真酶分別擴(kuò)增水稻gDNA 2 kb片段和小鼠gDNA 4 kb片段。以不同速度進(jìn)行擴(kuò)增,結(jié)果顯示,10154ES 10k/kb擴(kuò)增速度下,能得到目的條帶。M:1 kb DNA Marker(10510ES)。
靈敏度高
圖4. Hieff Canace® Plus高保真酶擴(kuò)增質(zhì)粒500 bp片段,不同模板量(1 pg-0.5 μg)均可有效擴(kuò)增,靈敏度低至1 pg。NC:陰性對照。M:100 bp DNA Marker(10507ES)。
穩(wěn)定性好
圖5. Hieff Canace® Plus穩(wěn)定性好,試劑于-80℃、-20℃、4℃、37℃分別放置1 d、7 d,擴(kuò)增小鼠gDNA 4 kb片段,Marker為Yeasen 1 kb DNA ladder (Cat#10510)。結(jié)果顯示,性能未受到影響。
圖6. Hieff Canace® Plus穩(wěn)定性好,擴(kuò)增小鼠gDNA 4 kb片段。1/2/3/4分別表示30/40/50/60%GC含量的基因,反復(fù)凍融50次,不影響產(chǎn)品性能。Marker為Yeasen 1 kb DNA ladder (Cat#10510)。
翌圣高保真酶以其超高的保真性、極佳的特異性以及超強(qiáng)的穩(wěn)定性廣受消費(fèi)者青睞。除了高品質(zhì)的高保真酶,翌圣也具有一系列完整的分子克隆解決方案。選擇翌圣,必定給你帶來不一樣的驚喜!
選品指南
產(chǎn)品定位 |
產(chǎn)品名稱 |
產(chǎn)品貨號 |
規(guī)格 |
高保真PCR Mix,可用于片段擴(kuò)增、基因克隆 |
10154ES |
100 μL |
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1mL |
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5×1 mL |
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長片段擴(kuò)增、基因克隆 |
10158ES |
1 mL |
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5×1 mL |
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50×1 mL |
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長片段擴(kuò)增、基因克隆 |
10159ES |
1 mL |
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5×1 mL |
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50×1 mL |
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單片段連接,可用于轉(zhuǎn)基因載體構(gòu)建 |
10911ES |
20T |
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多片段連接,可用于轉(zhuǎn)基因載體構(gòu)建 |
10922ES |
20T |
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適用于帶A尾的產(chǎn)物;用于靶基因測序、復(fù)制與保存 |
10907ES |
20T |
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適用于帶A尾的產(chǎn)物;用于亞克隆 |
10908ES |
20T |
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適用于平末端的產(chǎn)物;用于靶基因測序、復(fù)制與保存 |
10909ES |
20T |
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適用于平末端的產(chǎn)物;用于亞克隆 |
10910ES |
20T |
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感受態(tài)細(xì)胞、可用于DNA克隆和質(zhì)粒擴(kuò)增 |
11803ES |
10×100 μL |
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感受態(tài)細(xì)胞、可用于DNA克隆和質(zhì)粒擴(kuò)增 |
11802ES |
10×100 μL |
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蛋白表達(dá) |
BL21(DE3) Chemically Competent Cell BL21(DE3)化學(xué)感受態(tài)細(xì)胞 |
11804ES |
10×100 μL |
感受態(tài)細(xì)胞、可用于DNA克隆 |
11801ES |
10×100 μL |
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100×100 μL |
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